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抗原修复锅采用的修复方法一共有两种
发布时间:2020-01-14   点击次数:16次
   抗原修复锅怎样工作?
  看上去,抗原修复锅似我们烹饪的高压锅。这是一款功能独特的“高压锅”,主要用于抗原暴露的工作,主要的工作原理也是装玻片的几个分室可以达到高温(>120°C)高压。灵敏的传感控制器来保持一定的温度和压力及一定的时间,这些工作参数都是经过严格的科学实验得到的数据。当达到需要的温度,抗原修复锅会在该温度下保持几分钟,之后锅内玻片被冷却2个多小时,特殊设材质的内锅体控制了锅和玻片的冷却速度。
  免疫组织化学方法成功与否关键在于抗原决定簇的保存和暴露。组织经甲醛固定,甲醛的醛基与抗原蛋白的氨基交联,使决定簇的构像改变,从而影响检测蛋白表达。要充分暴露抗原决定簇,通常用到抗原修复锅。强烈推荐EMSz具有竞争力的一款产品,适于甲醛固定的组织经石蜡包埋后进行免疫染色前的处理,配合特别的抗原修复缓冲液确保你得到z高质量的免疫染色效果。
  (1)抗原修复锅的加热修复法:加热修复法分为高压加热修复法和微波修复法两种:
  ①高压加热修复法:取一定量枸橼酸盐缓冲液(pH=6.0)于高压锅中,大火加热直至沸腾。将脱蜡水化后的组织切片置于不锈钢或耐高温塑料切片架上,放人己沸腾的缓冲液中。盖上锅盖,扣紧压力阀,继续加热至喷汽。
  从喷汽开始计时.1~2分钟后,高压锅离开热源,冷却至室温(稍冷后,可在自来水笼头下加速冷却),取出玻片,先用蒸馏水冲洗2次,再用PBS冲洗2次,每次3分钟。注意加热时间长短的控制很重要,从组织切片放人缓冲液到高压锅离开火源的总时间控制在5―8分钟为好.
  时间过长可能会使染色背景加深。缓冲液的量必须保证能浸泡到所有切片,用过的枸橼酸缓冲液不能反复使用。
  ②抗原修复锅的微波修复法:取一定量pH6.0枸橼酸盐缓冲液(缓冲液量不得小于500m1),于微波盒中,微波加热直至沸腾,将脱蜡水化后的组织切片置于耐高温塑料切片架上。放人己沸腾的缓冲液中,中高档微波继续处理15―20分钟,取出微波盒冷却至室温,从缓冲液中取出玻片。先用蒸馏水冲洗2次,之后用PBS冲洗2次,每次3分钟。
  (2)胰蛋白酶消化修复法:主要用于细胞内抗原的显示。使用0.1%氯化钙液(pH7.8)制成0.1%胰蛋白酶液,37℃孵育切片15~30分钟,之后用PBS洗涤3次,每次3分钟。
  (3)胃蛋白酶消化修复方法:主要用于细胞间质抗原的显示。一般使用浓度为0.4%,消化时间为37℃,30~180分钟。
  以上便是今天关于抗原修复锅采用的修复方法一共有两种的全部分享了,希望对大家今后使用本设备能有帮助。
 
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